- 3 - (продолжение заключения эксперта № 7/1343 от 21.10.2022) Исследование ДНК Выделение ДНК ДНК из объекта №1, выделяли используя набор «реагентов для экстракции ДНК человека CorrDIS «Экстракт», производства фирмы ООО«ГОРДИЗ», Россия, в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией пользователя «-3.5 выделение ДНК из костной ткани». Раствор ДНК готов для проведения реакции амплификации. Оценка выделенной ДНК Для количественной и качественной оценки выделенной ДНК применяли полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени с использованием набора «Investigator® Quantiplex® Pro Kit» («QIAGEN») в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией. Реакцию амплификации и детекцию флуоресцентно меченных амплификационных фрагментов проводили с помощью прибора «7500 Real-Time PCR System» («Applied Biosystems», США). Обработку полученных данных проводили с помощью программы «HID Real-Time PCR Analysis Software Version 1.1». Результаты по определению концентрации ДНК в пробах, представлены в таблице № 1. Таблица 1 Концентрация ДНК в пробах Объекты исследования | Концентрация ДНК человека, нг/мкл | Концентрация мужской ДНК, нг/мкл Объект № 1 | 39,646 | - Отрицательный контроль выделения | - | - «-» - ДНК не выявлен Согласно данным о чувствительности для проведения исследования локусов ядерной ДНК концентрация ДНК должна быть не менее 0,00625 нг/мкл. Установлено, что в пробе ДНК (объект №1) содержится ДНК человека в количестве, достаточном для исследования ядерной ДНК. Таким, образом, установлено, что проба ДНК (объект №1) пригодна для исследования ядерной ДНК. Исследование локусов ядерной ДНК Для исследования локусов ДНК применяли полимеразную цепную реакцию (ПЦР), используя набор реагентов «Investigator® 24plex QS Kit» производства фирмы «QIAGEN» с локусами Amelogenin, TH01, D3S1358, vWA, D21S11, TPOX, DYS391, D1S1656, D12S391, SE33, D10S1248, D22S1045, D19S433, D8S1179, D2S1338, D2S441, D18S51, FGA, QS1, D16S539, CSF1PO, D13S317, D5S818, D7S820, QS2» в соответствии с инструкцией, представленной производителем реагентов. Реакцию амплификации проводили с помощью прибора «QIAamplifier 96» фирмы «QIAGEN». Для оценки специфичности амплификации использовали положительный контроль (проба ДНК с известными генетическими признаками ДНК 9948) и пробу без ДНК (отрицательный контроль). Разделение и детекцию флуоресцентно меченных амплификационных фрагментов проводили с использованием генетического анализатора «HONOR 1616», производства компании «Nanjing Superyears Gene Tehnology», КНР в среде полимера POP4. Определение размеров амплификационных фрагментов и установление номеров аллелей проводили на основе внутреннего стандарта длин DNA Size Standard 24plex (BTO) и DNA Size Standard 550 BTO входящих в набор реагентов аллельных лестниц с помощью программы GeneMapperID-X v 1.4.