(продолжение заключения эксперта № 7/1342 от 08.11.2022) - 4 - Исследование ДНК Выделение ДНК ДНК из объектов №1,2, выделяли используя набор реагентов для экстракции ДНК человека CorDIS «Экстракт», производства ООО «ГОРДИЗ», Россия, в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией пользователя – 3.5 выделение ДНК из костной ткани. Раствор ДНК готов для проведения реакции амплификации. Оценка выделенной ДНК Для количественной и качественной оценки выделенной ДНК применяли полимеразную цепную реакцию в реальном времени с использованием набора «Investigator® Quantiplex® Pro Kit» («eQIAGEN») в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией. Реакцию амплификации и детекцию флуоресцентного сигнала проводили с использованием прибора «7500 Real-Time PCR System» («Applied Biosystems», США). Обработку полученных данных PCR системы проводили с помощью программы «HID Real-Time PCR Analysis Software Version 1.1». Результаты по определению концентрации ДНК в пробах, представлены в таблице 1. Таблица № 1 Концентрация ДНК в пробах Объекты исследования | Концентрация ДНК человека, нг/мкл | Концентрация мужской ДНК, нг/мкл Объект № 1 | 1,200 | 1,109 Объект № 2 | 2,097 | 2,088 Отрицательный контроль выделения | - | - Согласно данным о чувствительности для проведения исследования локусов ядерной ДНК концентрация ДНК должна быть не менее 0,00625 нг/мкл. Установлено, что в пробах ДНК (объекты №1,2) содержится ДНК человека в количестве, достаточном для исследования локусов ДНК. Таким образом, установлено, что пробы ДНК (объекты №1,2) пригодны для исследования ядерной ДНК. Исследование локусов ядерной ДНК Для исследования локусов ДНК применяли полимеразную цепную реакцию (ПЦР), используя набор реагентов «Investigator® 24plex QS Kits» производства фирмы «QIAGEN», с локусами Amelogenin, TH01, DS1358, vWA, D21S11, TPOX, DYS391, D1S1656, D12S391, SE33, D10S1248, D1P9S433, D8S1179, D2S1338, D22S441, D18S51, FGA, QS1, D16S539, CSF1PO, D13S317, D5S818, D7S820, D7S820 в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией пользователя. Реакцию амплификации проводили с помощью прибора «QIAamplifier 96» фирмы «QIAGEN». Для оценки специфичности реакции амплификации использовали положительный контроль ДНК «с комплектом» к соответствующим генетическим маркерам (ДНК 9948) и пробу без ДНК (отрицательный контроль). Для детекции и электрофоретического разделения мечёных амплификационных фрагментов проводили с использованием генетического анализатора «HONOR 1616», фрагментного анализа компании «Nanjing Superyears Gene Tehnology», КНР с среде полимера РОР4. Определение длин амплифицированных фрагментов и их идентификацию проводили с использованием размерного стандарта «Nanjing Superyears Gene Tehnology», КНР в среде полимера РОР4. Определение длин амплифицированных фрагментов и их идентификацию проводили с использованием размерного стандарта, содержащего фрагменты размером от 35 до 350 РП, входящих в набор реагентов аллелирных аллелей локусов GeneMapper® ID-X v 1.4.