(продолжение заключения эксперта №7/1407 от 05.12.2022 г.)
[таблица: продолжение Таблицы №1 — объекты 4, 5, 6, концентрации ДНК]
Для проведения успешного типирования локусов ядерной ДНК концентрация ДНК человека в пробе должна быть не менее 0,0062 нг/мкл.
Установлено, что концентрация ДНК человека в пробах, выделенных из объектов № 1, № 2 достаточна для дальнейшего исследования.
Концентрация ДНК человека в пробах, выделенных из объектов № 3 – № 5 недостаточна для дальнейшего исследования.
В пробе, выделенной из объекта № 6, ДНК человека не выявлена.
Исследование локусов ДНК
Для исследования локусов ДНК применяли полимеразную цепную реакцию (ПЦР), используя набор реагентов «Investigator® 24plex QS Kit» с локусами Amelogenin, TH01, D3S1358, vWA, D21S11, TPOX, DYS391, D1S1656, D12S391, D10S1248, D22S1045, D19S433, D3S1179, D2S1338, D2S441, D18S551, FGA, QS1, D16S539, CSF1PO, D13S317, D5S818, D7S820, QS2 производства фирмы «QIAGEN» в соответствии с инструкциями. Для проведения реакции амплификации использовали амплификатор «QIAAmplifier 96» фирмы Qiagen. Для оценки специфичности реакции амплификации использовали положительный контроль (проба ДНК с известными генетическими признаками ДНК 9948 — Amelogenin X,Y) и отрицательный контроль.
Разделение и детекцию флуоресцентно меченых амплификационных фрагментов проводили с использованием генетического анализатора HONOR 1616 производства компании «Nanjing Supercyears Gene Technology Co., Ltd.»; КНР в среде полимера POP4. Определение длин амплифицированных фрагментов и установление номеров аллелей проводили на основе внутреннего стандарта длины DNA Size Standard 24plex (ВТО) и входящих в набор реагентов аллельных лэддеров с помощью программного комплекса GeneMapperID-X v 1.4. Данные анализа электрофореграмм представлены в приложении.
Результаты исследования локусов ДНК, выделенных из объектов № 1, № 2, представлены в таблице № 2.
Таблица № 2.
[таблица: Таблица №2 — локусы ДНК объект №1 и объект №2, положительный контроль 9948, отрицательный контроль, строки: Amelogenin, TH01, D3S1358, vWA, D21S11, TPOX, DYS391, D1S1656, D12S391, D10S1248, D22S1045, D19S433, ~20 строк, OCR нечитаем]