(продолжение заключения эксперта № 7/1373 от 17.10.2022)
- 3 -
Внешний вид фрагмента ребра и двух зубов, представленных на исследование
(иллюстрация №3)
Исследование ДНК
Выделение ДНК
Перед выделением из фрагмента ребра и двух зубов (отбирались представительные пробы –мягкие ткани ребра и один зуб) – объект №1, поверхности тщательно очищали, стерилизовали в 3%-ном растворе перекиси водорода и измельчали с помощью гомогенизатора «PRECELLYS 24», Франция.
ДНК из объекта №1 выделяли с помощью прибора «AutoMate Express Instrument», производства фирмы «Applied Biosystems», США, используя набор реагентов «PrepFiler Express BTA Forensic DNA Extraction Kit», производства фирмы «Applied Biosystems», США, в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией.
Раствор ДНК готов для проведения реакции амплификации.
Оценка выделенной ДНК
Для количественной и качественной оценки выделенной ДНК применяли полимеразную цепную реакцию в реальном времени с использованием набора «Investigator® Quantiplex® Pro Kit» («QIAGEN») в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией. Реакцию амплификации и детекцию флуоресценцию меченых амплифицированных фрагментов проводили с помощью прибора «7500 Real-Time PCR System» (Applied Biosystems, США). Обработку полученных данных проводили с помощью программы «HID Real-Time PCR Analysis Software Version 1.1». Результаты по определению концентрации ДНК в пробах, выделенных из фрагмента ребра (объект №1) представлены в таблице №1.
Таблица 1.
Концентрация ДНК в пробах
Объекты исследования | Концентрация ДНК человека, нг/мкл | Концентрация мужской ДНК, нг/мкл
Объект № 1 | 22,132 | 24,117
Отрицательный контроль выделения | - | -
а — ДНК не выявлена
Согласно данным о чувствительности для проведения исследования локусов ядерной ДНК концентрация ДНК должна быть не менее 0,00625 нг/мкл.
Установлено, что в пробе ДНК (объект №1) содержится ДНК человека в количестве, достаточном для проведения исследования ядерной ДНК.
Таким образом, установлено, что проба ДНК (объект №1) пригодна для исследования ядерной ДНК.
Исследование локусов ядерной ДНК
Для исследования локусов ДНК применяли полимеразную цепную реакцию (ПЦР), используя набор реагентов «Investigator® 24plex QS Kit» производства фирмы «QIAGEN», Amelogenin, STR11-