7
(продолжение заключения эксперта № 7/1355 от 21.10.2022)
Таблица № 1
Результаты по определению концентрации ДНК
[таблица: Объекты исследования, Концентрация ДНК человека (нг/мкл), Концентрация мужской ДНК (нг/мкл), ~6 строк]
Объект № 1: 0,015 / -
Объект № 2: 1,507 / 3,509
Объект № 3: 0,403 / 0,402
Объект № 4: 5,145 / 5,142
Отрицательный контроль выделения: - / -
«-» - ДНК не выявлена.
Согласно данным о чувствительности для проведения исследования локусов ядерной ДНК концентрация ДНК должна быть не менее 0,0062 нг/мкл.
Установлено, что в объектах № 1 - № 4 определяется ДНК в количестве, достаточном для дальнейшего исследования. В пробе (отрицательный контроль выделения) ДНК человека отсутствует.
Таким образом, установлено, что пробы ДНК (объекты № 1 - № 4) пригодны для исследования ядерной ДНК.
5.3. Исследование локусов ядерной ДНК.
Для исследования локусов ДНК применяли полимеразную цепную реакцию (ПЦР), используя набор реагентов «Investigator® 24plex QS Kit» производства фирмы «QIAGEN» с локусами Amelogenin, TH01, D3S1358, vWA, D21S11, TPOX, DYS391, D1S1656, D12S391, SE33, D10S1248, D22S1045, D2S1338, D16S539, D2S441, D18S51, FGA, QS1, D16S539, CSF1PO, D13S317, D5S818, D7S820, QS2, в соответствии с инструкцией, представленной производителем реагентов. Реакцию амплификации проводили с помощью прибора «QIAamplifier 96» фирмы «QIAGEN». Для оценки специфичности реакции амплификации использовали положительный контроль (проба ДНК с известными генетическими признаками ДНК 9948) и пробу без ДНК (отрицательный контроль).
Разделение и детекцию флуоресцентно меченых амплифицированных фрагментов проводили с использованием прибора капиллярного электрофореза «Нопor 1616», производства компании «Nanjing Superyears Gene Technology Co LTD» (КНР) в среде полимера POP4. Определение длин амплифицированных фрагментов и установление генотипов проводили на основе внутреннего стандарта длины (Size Standard 24plex (BTO)) и входящих в набор реагентов аллельных лэддеров с использованием программы GeneMapper ID-X v 1.4.
Данные анализа электрофореграммы представлены в приложении. Результаты исследования локусов ДНК, представленные в виде таблицы, приведены в табл. № 2.