2. Исследование локусов ядерной ДНК
Для типирования полиморфных STR-локусов аутосомной ДНК биологических образцов █████████ █. █. и █████████ █. █. использовали набор для полимеразной цепной реакции, используя набор реагентов «VeriFiler™ Express PCR Amplification Kit» («Applied Biosystems», США): D3S1358; vWA; D16S539; CSF1PO; TROX; Yindel; Amelogenin; D8S1179; D21S11; D18S51; D2S441; D19S433; TH01; FGA; D22S1045; D5S818; D13S317; D11S; D7S820; D6S1043; D10S1248; D1S1656; D12S391; Penta D, в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией.
Реакцию амплификации проводили с помощью прибора «GeneAmp PCR system 9700» («Applied Biosystems», США). Для оценки специфичности реакции амплификации использовали положительную пробу контрольной ДНК (К+) с известными генетическими признаками: проба ДНК 007 – D3S1358-15,16; vWA-14,16; D16S539-9,10; CSF1PO-11,12; TROX-8,8; Yindel-2; Amelogenin X,Y; D8S1179-12,13; D21S11-28,31; D18S51-12,15; D2S441-12,15; D19S433-14,15; TH01-7,9,3; FGA-24,26; D22S1045-11,16; D5S818-11,11; D13S317-11,11; D7S820-7,12; D10S1248-12,15; D1S1656-13,16; D12S391-18,19; D21S1338-20,23; Penta E-7,12; Penta D-11,12; D6S1043-12,14, а также отрицательный контроль (К-) – пробу без ДНК.
Разделение и детекцию флуоресцентно меченных амплифицированных фрагментов проводили с использованием системы капиллярного электрофореза на генетическом анализаторе модели «ABI PRISM 3500 Genetic Analyzer» («Applied Biosystems», США), в соответствии с руководством пользования, в среде полимера POP-4 («Applied Biosystems», США).
Определение длин амплифицированных фрагментов и идентификацию аллелей проводили на основе внутренних стандартов длины «Size Standard GeneScan™600 LIZ Size Standard v2.0» («Applied Biosystems», США) из входящих в наборы реагентов аллельных лэддеров автоматически с помощью программного комплекса GeneMapper ID-X Version 1.4.
Результаты исследования STR-локусов аутосомной ДНК представлены в таблице №1 и Приложении №1 с электрофореграммами.
Таблица №1
Результаты исследования STR-локусов аутосомной ДНК биологических образцов.
[таблица: Исследованный локус / Биологические образцы (█████████ █. █., █████████ █. █.) / Контроли (К+ 007, К-), ~25 строк, данные по аллелям, OCR нечитаем частично]